胰岛素通常需要注射在皮下脂肪丰富的部位，主要有腹部、大腿外侧、上臂外侧和臀部外上侧。注射部位需轮换以避免局部脂肪增生或萎缩。
腹部是胰岛素吸收最快的部位，适合注射短效或速效胰岛素，需避开脐周5厘米范围。大腿外侧吸收速度中等，适合中效胰岛素注射，注射时应捏起皮肤避免误入肌肉。上臂外侧吸收速度与大腿相近，但需他人协助注射。臀部外上侧吸收最慢，适合长效胰岛素注射，可减少低血糖风险。每次注射需间隔至少2.5厘米，同一部位每月不宜重复注射。
注射前需检查皮肤有无硬结或红肿，注射后无须按摩以免加速吸收。轮换注射部位需记录时间与位置，使用酒精棉片消毒待干后再注射。未开封的胰岛素应冷藏保存，已开封的可室温存放30天。外出携带需避免冷冻或高温，注射笔避免剧烈晃动。注射针头应每次更换，重复使用可能导致针头堵塞或感染。