叶酸片在常规剂量下通常安全性较高，但过量或长期服用可能引起恶心、食欲减退、腹胀等胃肠反应，极少数情况下可能掩盖维生素B12缺乏的贫血症状。
叶酸片作为水溶性维生素，在每日补充0.4-1毫克范围内较少出现不良反应。部分敏感人群服用后可能出现轻度胃肠不适，表现为饭后饱胀感或味觉异常，这种症状多与空腹服药有关，调整为餐后服用可缓解。个别患者长期每日摄入超过1毫克叶酸时，可能干扰锌元素吸收，出现口腔溃疡或皮疹等表现。临床观察发现，大剂量叶酸可能影响抗癫痫药物疗效，癫痫患者需在医生监测下使用。有研究提示过量叶酸摄入可能与某些肿瘤风险存在潜在关联，但尚需更多证据支持。
需要特别注意的是，叶酸补充可能掩盖维生素B12缺乏导致的巨幼细胞性贫血症状，使神经损害持续进展而未及时被发现。这种情况多见于长期大剂量补充且未定期检测维生素B12水平的老年人。另有罕见报道显示，部分人群对叶酸存在过敏反应，表现为皮肤瘙痒或呼吸困难，需立即停药就医。对于肾功能不全者，叶酸代谢能力下降可能导致体内蓄积，建议在医生指导下调整剂量。
建议备孕女性及妊娠早期妇女每日补充0.4-0.8毫克叶酸，普通成人通过均衡饮食即可满足需求，动物肝脏、深绿色蔬菜、豆类等食物富含天然叶酸。服用叶酸片期间应避免同时饮用浓茶或咖啡，以免影响吸收。若需长期服用，建议每3-6个月检测血清叶酸及维生素B12水平。出现持续头痛、皮疹或消化不良等症状时应及时咨询医生，不可自行增加剂量。特殊人群如癫痫患者、癌症患者、肾功能障碍者使用叶酸前必须经过专业评估，确保用药安全。