双缩脲试剂检测蛋白质的原理是基于蛋白质中的肽键在碱性条件下与铜离子形成紫色络合物。
1、碱性环境
双缩脲试剂中的氢氧化钠提供碱性环境，使蛋白质肽键中的氮原子解离，暴露出游离电子对。
2、铜离子络合
硫酸铜溶液中的二价铜离子与肽键中的氮原子形成稳定的五元环状络合物，呈现特征性紫色。
3、颜色反应
络合物在540nm波长处有最大吸收峰，紫色深浅与蛋白质浓度成正比，实现定量检测。
4、特异性识别
该反应对含两个以上肽键的化合物特异，氨基酸和单肽不显色，避免假阳性干扰。
实验时需注意试剂添加顺序，先加碱液再加铜液，避免氢氧化铜沉淀影响检测结果。
