叶酸早上或晚上服用效果差异不大，关键需固定时间规律补充。叶酸吸收利用主要受空腹状态、药物相互作用、胃肠功能、个体代谢差异、合并用药等因素影响。
晨起空腹服用叶酸有利于吸收，胃酸分泌较少时药物溶解更充分。部分人群早餐后服用可减少胃肠刺激，尤其适合存在慢性胃炎或胃溃疡者。需注意避免与含钙镁的制酸剂同服，间隔两小时以上为宜。某些降压药或抗癫痫药物可能影响叶酸代谢，建议咨询医生调整用药时间。
晚间服用适合易忘记晨间用药者，固定睡前时间可提升服药依从性。但部分人群夜间代谢速率降低可能影响利用效率，合并镇静类药物者需警惕相互作用。饮食中富含维生素C的果蔬可促进叶酸转化，晚餐搭配西蓝花、猕猴桃等食物有助于生物利用。长期服用抗叶酸药物者需监测血液中叶酸浓度。
备孕及孕期女性建议选择记忆度高的固定时段服用，哺乳期可延续孕期的用药习惯。存在巨幼红细胞性贫血者需配合维生素B12补充，两者服用时间应保持一致。无论选择何时补充，连续三个月以上规律摄入才能维持稳定的血清叶酸水平。定期检测同型半胱氨酸浓度可评估补充效果，必要时需调整剂量或联合补充相关营养素。