人参皂苷Rh2的抗癌功效

人参皂苷Rh2的抗癌功效

发布日期：2020-09-18 16:15:18   浏览次数：9

观察人参皂苷R h2对人白血病细胞株H L60增殖及凋亡的调节作用。方法：利用流式细胞术检测白血病细胞株H L60在人参皂苷R h2处理过程中细胞增殖周期的改变及凋亡发生的情况；另一方面通过动物实验，将药物处理前后的细胞株注射裸鼠，验证该药物是否能够有效抑制H L60细胞在动物体内的恶性增殖及白血病症状。结果：药物处理后的H L60细胞在G 1 期比例降低，S期比例显著升高（P<0.05），药物处理后H L60细胞早期及中晚期细胞凋亡率为40% 左右，明显高于未处理组H L60细胞，人参皂苷R h2通过介导S期阻滞作用从而使H L60细胞进入凋亡程序。通过动物实验证明了人参皂苷R h2能够抑制H L60细胞在体内的恶性增殖。结论：人参皂苷R h2能够抑制人白血病细胞株H L60的恶性增殖并促进其发生凋亡。人参是中医药传统的补气要药，以其攻补兼施、毒副作用小或无、注重整体的优越性已得到广泛认可。人参皂苷单体R h2是从红参中提取的天然活性成分，具有很高的抗肿瘤活性。以人白血病H L60细胞株为受试对象，研究人参皂苷单体R h2对H L60细胞增殖和凋亡的影响，为进一步阐明人参皂苷单体抗白血病作用的机制，使其应用于白血病的临床治疗提供更多的实验依据。

材料与方法

1. 材料

1.1 细胞培养 H L60细胞为第二军医大学医学发育生物学中心馈赠，用含10％小牛血清（杭州四季青生物公司）的R PM I1640（Gibco）在37℃、5％CO 2 的培养箱中培养。细胞培养板、培养瓶、培养皿（FALCON，BD）。1.2 人参皂苷Rh2配液 人参皂苷Rh2（购置上海同田生物技术有限公司）溶于PBS（pH 值7.4）中配成50g/L母液，超滤除菌，-20℃保存备用。用R PM I1640配成所需工作浓度50m g/L，4℃保存备用。1.3 动物 BA LB/c Nu品系裸鼠共24只，3-5周龄，雌雄各半，体质量约15-25g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证批号为SXCK（沪）2007-0005。

2. 方法

2.1 观察人参皂苷单体Rh2对细胞生长的抑制作用 取对数生长期细胞制成细胞悬液，浓度1×10 4 /m L，接种于24孔培养板内，每孔1m L。6h后加入不同浓度的人参皂苷单体R h2，使终浓度分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00m g/L，每一质量浓度组均设4孔。12、24、36、48、60、72h，每次取3孔细胞，轻轻吹打均匀，血细胞计数板（密理博细胞计数器）计数，每孔数3次，计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率=[1-（处理组细胞绝对数/对照组细胞绝对数）] × 。

2.2 细胞凋亡检测 分别收集未处理组H L60细胞和药物处理组H L60细胞，每组约为2×10 5 个细胞，离心去上清，加入100μL PBS。室温避光孵育30m in后，2m L PBS洗涤2遍，加入400μL PBS，上机检测前5m in加入5μL PI（50μg/μL）。流式细胞仪LSRⅡ（BD Biosciences）计数10 000个细胞，检测细胞凋亡。

2.3 细胞周期测定 收集未处理组H L60细胞和工作浓度药物处理3d后H L60细胞，每组约为1×10 6 个细胞，至离心管中，离心去上清后加入70% 乙醇，混匀，4℃固定24h。将固定过的细胞用PBS洗2遍，加入100μL PBS，混匀。加入50μL R NA酶（1m g/m L）37℃消化30m in，各管再加入400μL PBS并将细胞液转入相应流式管中，上机前5m in各管加50μL PI（250μg/μL），混匀。流式细胞仪计数10 000个细胞，检测细胞周期分布；分析软件采用M odfit LT 3.0。

2.4 在体裸鼠动物实验 BALB/c Nu品系裸鼠共24只，随机分为3组。收集药物处理后的H L60细胞和野生组H L60细胞，每组取2×10 5 细胞，离心去上清，加入200μL PBS，取1m L注射器抽取细胞悬液注射入裸鼠腹部皮下。SPF级喂养，每日观察。各组裸鼠分别于注射细胞后1个月颈椎脱臼活杀，观察组织和器官的颜色、光泽、质地、有无结节等。分别取肺脏、肝脏、肾脏、脾脏等组织器官，福尔马林固定后H E染色进行病理学检查。2.5 统计学方法 采用SPSS 17.0软件进行数据分析，总体采用方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。