叶酸片的服用时间需根据个体情况决定，备孕期及妊娠期女性通常需持续服用至妊娠满3个月，存在高危因素者可能需延长至分娩。其他人群应在医生指导下调整用药周期。
备孕女性应从孕前3个月开始每日补充0.4-0.8毫克叶酸，持续至妊娠满3个月。该阶段是胎儿神经管发育关键期，规律补充可降低神经管缺陷风险。妊娠中晚期若血清叶酸水平不足或存在营养不良，医生可能建议继续服用。对于有神经管缺陷生育史、叶酸代谢基因突变、糖尿病等高风险孕妇，需从孕前1个月开始每日增补4-5毫克叶酸，并维持至妊娠结束。长期服用抗癫痫药、甲氨蝶呤等药物干扰叶酸代谢者，需根据血药浓度监测结果决定补充周期。胃肠吸收功能障碍患者可能需延长补充时间，必要时采用注射剂型。
非妊娠人群因巨幼细胞性贫血补充叶酸时，待血红蛋白恢复正常后仍需维持治疗1-3个月。高同型半胱氨酸血症患者需长期小剂量维持，心脑血管疾病高危人群建议结合维生素B12联合补充。肾功能不全者需根据肾小球滤过率调整剂量，避免过量蓄积。常规体检发现血清叶酸水平达到30nmol/L以上时，可在医生评估后考虑减停。
服用叶酸期间应定期检测血清叶酸及同型半胱氨酸水平，避免与锌剂同时服用影响吸收。备孕夫妇可共同进行叶酸代谢基因检测，日常多摄入动物肝脏、深绿色蔬菜等天然叶酸食物。出现食欲减退、恶心等不适症状时应及时就医调整方案，切勿自行增减药量。