硝酸甘油不能用于严重贫血、青光眼、低血压、肥厚型梗阻性心肌病、对硝酸酯类药物过敏或近期服用西地那非等药物的情况。硝酸甘油是治疗心绞痛的常用药物，但特定生理或病理状态可能加重其不良反应或导致治疗无效。
严重贫血患者因血液携氧能力下降，硝酸甘油的扩血管作用可能进一步降低组织供氧，诱发晕厥或休克。青光眼患者尤其是闭角型青光眼，药物可能升高眼压加剧病情。低血压患者使用后血管扩张效应会加重血压下降，出现头晕甚至意识丧失。肥厚型梗阻性心肌病患者服用后可能加重左心室流出道梗阻，导致心输出量锐减。对硝酸酯类过敏者会出现皮疹、喉头水肿等过敏反应，而西地那非等PDE5抑制剂与硝酸甘油联用可能引发致命性低血压。
日常护理中应避免突然改变体位以防体位性低血压，服药后出现头痛属常见反应但持续不缓解需就医。心绞痛发作时若连续含服3片仍无效，可能提示急性心肌梗死需立即呼叫急救。药物需避光保存于原装棕色瓶内，开封后3-6个月未用完应更换。随身携带需避免贴身存放以免体温加速药物失效。