蛛网膜下隙穿刺术的穿刺方法主要有直入法、旁入法、侧卧位法、坐位法、超声引导法。
1、直入法
直入法是蛛网膜下隙穿刺术的常用方法之一，操作时患者取侧卧位，头部和膝盖尽量向胸部弯曲，使脊柱后凸增大。穿刺点通常选择腰椎第三至第四间隙或第四至第五间隙，消毒后使用穿刺针垂直刺入皮肤，缓慢进针直至突破硬脊膜，此时会有脑脊液流出，表明穿刺成功。直入法适用于大多数患者，操作相对简单，但对脊柱畸形或肥胖患者可能有一定难度。
2、旁入法
旁入法适用于脊柱强直或腰椎间隙狭窄的患者。操作时患者同样取侧卧位，穿刺点选择在棘突旁开1-1.5厘米处，穿刺针以与皮肤呈45度角的方向向中线进针，穿过黄韧带和硬脊膜后进入蛛网膜下隙。旁入法可以避开棘突和韧带钙化区域，提高穿刺成功率，但技术要求较高，需要操作者具备一定经验。
3、侧卧位法
侧卧位法是蛛网膜下隙穿刺术的标准体位，患者取左侧或右侧卧位，头部和膝盖尽量向胸部弯曲，使脊柱后凸增大，椎间隙增宽。穿刺点通常选择腰椎第三至第四间隙，消毒后使用穿刺针垂直刺入。侧卧位法操作简单，脑脊液流出顺畅，适用于大多数诊断性和治疗性穿刺，是临床最常用的方法之一。
4、坐位法
坐位法适用于肥胖患者或需要测定脑脊液压力的情况。患者取坐位，背部与床沿平齐，双脚放在凳子上，头部和上肢向前弯曲靠在支撑物上。穿刺点选择腰椎第三至第四间隙，消毒后使用穿刺针垂直刺入。坐位法可以增加脑脊液压力，使脑脊液流出更顺畅，但患者可能因体位不适而难以保持稳定，需要助手协助固定体位。
5、超声引导法
超声引导法是近年来发展起来的新技术，适用于解剖结构异常或传统穿刺困难的患者。操作时使用超声探头定位腰椎间隙和穿刺路径，实时引导穿刺针进入蛛网膜下隙。超声引导法可以提高穿刺成功率，减少并发症，特别适用于肥胖、脊柱畸形或既往穿刺失败的患者，但需要专门的超声设备和操作技术。
蛛网膜下隙穿刺术后患者需要平卧6-8小时，避免剧烈活动，多饮水以促进脑脊液生成。穿刺部位保持清洁干燥，观察有无头痛、恶心、呕吐等不良反应。如出现持续头痛、发热或穿刺部位红肿热痛等症状，应及时就医。术后24小时内避免驾驶或操作机械，饮食宜清淡易消化，避免辛辣刺激性食物。