口服葡萄糖耐量试验不适合妊娠期糖尿病筛查已确诊者、严重胃肠功能紊乱者、近期消化道手术者、糖代谢急性紊乱者及对试验用葡萄糖过敏者。
妊娠期糖尿病筛查已确诊者无须重复进行该试验，因诊断明确的糖尿病患者血糖波动规律已被掌握，试验可能加重高血糖风险。严重胃肠功能紊乱者如胃轻瘫、肠梗阻患者，由于糖水吸收速率异常会导致假阳性或假阴性结果。近期接受食管、胃、肠切除术的患者，消化道结构改变会影响葡萄糖吸收过程。处于糖尿病酮症酸中毒、高渗状态等糖代谢急性紊乱期的患者，试验可能诱发危象。极少数对葡萄糖或试验辅料过敏者可能出现荨麻疹、呼吸困难等过敏反应。
进行口服葡萄糖耐量试验前应禁食8-12小时，试验期间避免剧烈运动。存在心脑血管疾病者需医生评估风险，试验过程中出现心悸、冷汗等低血糖症状需立即终止。建议试验后进食富含优质蛋白和膳食纤维的食物，如鸡蛋、燕麦等，帮助稳定血糖。长期服用利尿剂、糖皮质激素等影响糖代谢药物者，需咨询医生调整用药方案后再考虑试验。