肝功能检查通常需要空腹8-12小时。空腹状态有助于避免饮食对转氨酶、胆红素等指标的干扰，主要影响因素有检查项目要求、进食后生理变化、药物代谢、个体差异、急诊特殊情况等。
肝功能检查中的转氨酶、胆红素、白蛋白等指标容易受食物影响。进食后血液中甘油三酯浓度升高，可能导致血清浑浊，干扰光学检测结果。高脂饮食可能暂时性升高谷丙转氨酶水平，高蛋白饮食可能影响血氨检测准确性。部分检查如胆汁酸测定对空腹要求更为严格，餐后2小时胆汁酸水平可能升高数倍。
部分特殊情况下非空腹状态也可进行检查。急诊患者或婴幼儿无法长时间禁食时，医生会根据临床需要调整解读标准。某些慢性肝病随访项目如仅监测已知稳定的指标，可能无须严格空腹。但结果解读需结合临床，若发现异常值仍需空腹复查确认。服用维生素C或部分抗生素等药物时，即使空腹也可能干扰结果。
检查前3天应避免饮酒和高脂饮食，空腹期间可少量饮水。若需同时进行血糖、血脂检测，空腹时间需同步满足所有项目要求。检查后应及时进食避免低血糖，长期服药者需咨询医生是否需要调整用药时间。肝功能异常者应定期复查并完善病毒性肝炎、超声等进一步检查。
